1. 適用范圍
適用于熟牛肉中的五種人工合成色素(檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃 、亮藍(lán))的測(cè)定。

2. 提取
精確稱(chēng)取2±0.2 g 粉碎后的熟牛肉，于50 mL聚丙烯離心管中，加入5 mL丙酮：水（90:10）混合溶液，渦動(dòng)1min，均質(zhì)1min（1000rpm），4000 rpm離心5 min，轉(zhuǎn)移上清液于50 mL離心管中，殘?jiān)? mL丙酮：水（90:10）混合溶液重復(fù)提取兩次，合并上清液。上清液中加入10 mL石油醚（60-90℃），上下翻轉(zhuǎn)5次，4000rpm離心3min，除去石油醚層，下層于80 ℃氮吹至2 mL以下，加入定容至5 mL，混勻，待凈化。

3. 凈化
預(yù)處理：向Welchrom^® P-WAX（60mg/3mL）中加入3 mL甲醇、3 mL水，流出液棄去；
上樣：將上述提取液加入柱中，流出液棄去，用5 mL水涮洗樣品管，轉(zhuǎn)入SPE柱；
淋洗：3 mL甲醇、3 mL甲醇：甲酸（6：4）依次過(guò)柱、3 mL正己烷過(guò)柱，小柱真空干燥5 min；
洗脫： 3*1 mL 5%甲醇洗脫，收集；
重新溶解：80 ℃氮吹至干，1 mL水復(fù)溶，渦動(dòng)30 s，過(guò)0.22μm濾膜，待分析；

4. 檢測(cè)
色譜條件：
色譜柱： Ultimate^® XB-C18 液相色譜柱（4.6 mm x 150 mm, 3 μm）

時(shí)間（min） 流動(dòng)相A（%） 流動(dòng)相B（%） 0 92 8 1 92 8 4 80 20 9 10 90 11 10 90 11.1 92 8 17 92 8

流動(dòng)相：
A: 0.02mol/L乙酸銨水溶液（乙酸調(diào)節(jié)pH=4）
B: 甲醇
梯度洗脫程序見(jiàn)右圖
流速：0.7 mL/min
進(jìn)樣量： 20 μL
柱溫： 40°C
檢測(cè)波長(zhǎng)： 254 nm
運(yùn)行時(shí)間：17 min
5. 附圖

1. 檸檬黃； 2.莧菜紅； 3.胭脂紅；4. 日落黃 ；5.亮藍(lán)
方法中使用到的耗材
1、 檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)品：WEL-S-0001
莧菜紅標(biāo)準(zhǔn)品：WEL-S-0002
胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)品：WEL-S-0003
日落黃標(biāo)準(zhǔn)品 ：WEL-S-0004
亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品：WEL-S-0005
2、 固相萃取小柱：Welchrom^® P-WAX（60mg/3mL，P/N：WSP050306）
3、 液相色譜柱：Ultimate® XB-C18,4.6 mm x 150 mm, 3 μm（Ult3B18415）
4、 13mm，孔徑0.22μm尼龍針孔濾膜（P/N: WEL-SFNY213022）
5、 12孔固相萃取裝置（WEL-Vac-12）