English大口徑毛細(xì)管氣相色譜法快速測(cè)定MRS肉湯培養(yǎng)基中水溶性膽固醇
2013-01-19
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建立了MRS 肉湯培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的氣相色譜測(cè)定法。1 mL 樣品( 含水溶性膽固醇的MRS肉湯培養(yǎng)基) 與5 mL 0． 5 mol /L KOH-甲醇溶液混合，然后于60 ℃水浴皂化30 min。產(chǎn)物游離膽固醇經(jīng)5 mL甲苯萃取后，采用HP-5 大口徑石英毛細(xì)管柱( 30 m × 0． 53 mm i． d． × 1． 5 μm) 進(jìn)行分離、FID 檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)、外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。本方法分析一個(gè)樣品僅需45 min; 在5 ～ 250 mg /L 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好; 回收率為95． 6% ～ 98． 0%; 日內(nèi)與日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1． 6%和1． 9%。本方法具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
水溶性膽固醇是一類由人工合成的化學(xué)物質(zhì)，在自然界中并不存在。Proksch 等于1978 年報(bào)道了以膽固醇、二元酸和聚乙二醇為原料合成水溶性膽固醇的工藝路線。水溶性膽固醇初被用于質(zhì)控血清中的膽固醇源，后來其應(yīng)用范圍逐漸擴(kuò)展。在微生物學(xué)領(lǐng)域，水溶性膽固醇主要用于研究乳酸菌體外對(duì)培養(yǎng)基中膽固醇的脫除作用。由于膽固醇本身不溶于水，因此在添加到培養(yǎng)基之前必須進(jìn)行乳化處理，以使其在水相中能穩(wěn)定存在。而水溶性膽固醇在水中則具有高達(dá)60 g /L 的溶解度，無需乳化便可直接添加到培養(yǎng)基中，因而被廣泛應(yīng)用。
為了模擬腸道環(huán)境，培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的添加量通常為100 mg /L 左右。不同乳酸菌對(duì)培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的脫除能力有很大差別。某些乳酸菌對(duì)培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的脫除能力可高達(dá)80%。這表明當(dāng)培養(yǎng)結(jié)束后，培養(yǎng)基上清液中的水溶性膽固醇的濃度可降低至20 mg /L 左右。硫酸-鄰苯二甲醛比色法是目前能夠?qū)θ绱说秃磕懝檀歼M(jìn)行檢測(cè)的比色法，因而被廣泛應(yīng)用。然而，該方法偶爾會(huì)出現(xiàn)原因不明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可重復(fù)的現(xiàn)象。因此，有必要開發(fā)一種穩(wěn)定性更好的檢測(cè)方法。本研究對(duì)氣相色譜測(cè)定培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的方法進(jìn)行了研究，獲得了較滿意的結(jié)果。
為了模擬腸道環(huán)境，培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的添加量通常為100 mg /L 左右。不同乳酸菌對(duì)培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的脫除能力有很大差別。某些乳酸菌對(duì)培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的脫除能力可高達(dá)80%。這表明當(dāng)培養(yǎng)結(jié)束后，培養(yǎng)基上清液中的水溶性膽固醇的濃度可降低至20 mg /L 左右。硫酸-鄰苯二甲醛比色法是目前能夠?qū)θ绱说秃磕懝檀歼M(jìn)行檢測(cè)的比色法，因而被廣泛應(yīng)用。然而，該方法偶爾會(huì)出現(xiàn)原因不明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可重復(fù)的現(xiàn)象。因此，有必要開發(fā)一種穩(wěn)定性更好的檢測(cè)方法。本研究對(duì)氣相色譜測(cè)定培養(yǎng)基中水溶性膽固醇的方法進(jìn)行了研究，獲得了較滿意的結(jié)果。
